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1、肯定是开环，不然怎么连接。

2、连接的原理就是试剂盒中的载体pMD19-T是已经经过内切酶EcoRv反应了的，并且在露出T的一端继续添加几个T，而我们的PCR反应中，在聚合酶的作用下，会在一端添加A，这样它们在反应中就很快连接成功。